層析冷柜是專為生化層析實(shí)驗(yàn)而研制的特殊用途低溫柜,同時(shí)也可進(jìn)行其他需要低溫環(huán)境的實(shí)驗(yàn);不做實(shí)驗(yàn)時(shí)則可用于物品冷藏保存。在推出的早期,主要關(guān)注于功能,對(duì)其他功能則被忽略了。隨著各領(lǐng)域?qū)游龉竦男枨笤黾?,其功能也由單一功能向多功能進(jìn)行發(fā)展轉(zhuǎn)變。由此給選型帶來一定難度。
一、凝膠過濾層析
凝膠過濾分子篩層析是利用有一定孔徑范圍的多孔凝膠作為固定相,對(duì)混合物中各組分按分子大小進(jìn)行分離的技術(shù)。具有分子篩作用的物質(zhì)很多,如浮石、瓊脂、瓊脂糖、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、葡聚糖凝膠等。
二、離子交換層析
離子交換法是以具有離子交換性能的物質(zhì)作固定相,利用它與流動(dòng)相中的離子能進(jìn)行可逆的交換性質(zhì)來分離離子型化合物的一種方法。
1、緩沖液與pH:選擇適當(dāng)?shù)木彌_體系,起始濃度要盡可能低些(0.01-0.05M)緩沖液PH值:陽離子低于pI一個(gè)pH單位以上陰離子通常高于pI一個(gè)pH單位以上。蛋白質(zhì)在不同pH下保留行為差別較大,所以許對(duì)緩沖體系和操作pH進(jìn)行摸索,以得到較佳條件。
2、離子強(qiáng)度;洗脫時(shí)多采用離子濃度梯度,常加NaCl,KCl,LiCl等.在不同鹽濃度(離子強(qiáng)度)及其不同變化率(梯度)條件下保留行為不同,需對(duì)該條件進(jìn)行摸索。一般的,隨離子強(qiáng)度增加,蛋白質(zhì)保留值減小。
三、疏水層析
原理:基于生物分子表面疏水性不同而達(dá)到分離的技術(shù)。疏水作用來自于分子的水化結(jié)構(gòu),高濃度鹽溶液破壞生物分子的水化結(jié)構(gòu),使蛋白質(zhì)內(nèi)部的疏水基團(tuán)暴露于分子外表面,從而可與疏水介質(zhì)結(jié)合。
蛋白質(zhì)以高濃度鹽溶液結(jié)合與柱上,以低濃度鹽溶液洗脫。生物分子表面大都有或強(qiáng)或弱的疏水區(qū)域,在不同環(huán)境下,與各種疏水介質(zhì)產(chǎn)生不同強(qiáng)弱的結(jié)合。高離子強(qiáng)度可加強(qiáng)疏水性。跟離子交換相反,高鹽吸附,低鹽洗脫;洗脫樣品又可直接或稍加稀釋后加上其他柱,作為連接步驟的橋梁,取代鹽析沉淀技術(shù)。配體種類繁多,很難預(yù)測哪一種、哪一個(gè)條件適合,可用試盒選擇介質(zhì)
四、親和層析
親和是利用待分離物質(zhì)和它的特異性配體間具有特異的親和力,從而達(dá)到分離目的的一類特殊層析技術(shù)。親和層析純化過程簡單、迅速,且分離效率高。